Actividad 14: Técnica didesoxi


Rellena los espacios en blanco para deducir como se lleva a cabo la técnica didesoxi que permite la secuenciación de un gen.

   3’-OH      aísla      ADN      ADN desconocido      ADN molde      ADN polimerasa      Autorradiografía      bases complementaria      cebador marcado      clona      cuatro      ddATP      ddCTP      ddGTP      ddTTP      desnaturaliza      dideoxi      didesoxinucleótido trifosfato      electroforesis vertical      grandes      hélice sencilla      longitudes      nucleótidos trifosfato      pequeñas      primer      rápidamente      radiactivamente      secuenciar      una   

técnica didesoxi
A. Se y se el que se desea , este ADN se y se emplea sola hélice en la secuenciación.

B. Se preparan tubos de reacción, cada uno con:
- El de que se desea secuenciar
- .
- El (en la secuenciación se utiliza un cebador o “” marcado que suministra el extremo que necesita la ADN polimerasa)
- Los cuatro requeridos para la formación de ADN.

A cada tubo se le añade una pequeña proporción de un , un tubo con , otro con , el tercero con y el cuarto con .
En cada uno de estos tubos se producirán cadenas de de distintas , terminando todas en el lugar en el que se incorporó el correspondiente añadido al tubo.

C. Posteriormente, estas piezas de ADN se separan mediante en gel.
Las piezas más migran más que las y la secuencia se puede leer directamente sobre el gel.

D. del gel de secuenciación, para obtener el bandeado correspondiente; de donde se obtienen los resultados, la secuencia de de la original.